产品及特点

小麦线条花叶病毒( Wheat Streak Mosaic Virus，WSMV)，是一种重要的检疫性有害生物，主要通过郁金香瘤螨Aceria tulipae传播，传毒率为25-100%，还可由小麦种子传毒。该病毒自然寄主主要为麦类作物。在冬小麦上越冬，小麦返青后即在心叶危害产卵繁殖，抽穗后转入穗部，灌浆时转入小麦颖壳或麦粒表面，麦收后转入附近的玉米、高粱、糜子、狗尾草、冰草、芦苇及自生麦，秋播小麦出苗后转入麦田，构成侵染循环，实现定殖，因此该病毒传入后，定殖的可能性较大。小麦感病越早发病愈重，冬前发病不能拔节抽穗，提早枯死造成绝收；拔节期感病植株严重矮化，仅主穗和个别分蘖抽穗，穗小粒少有40%植株无收；拔节后感病结实小穗减少，千粒重降低，单株减产64%，造成很大的经济损失。因而一旦传入扩散，会对中国的农业生产造成潜在的威胁，且检疫风险为高。因此灵敏快捷地检测小麦线条花叶病毒具有重要的意义。本产品就是为满足此需求而开发的、专门检测小麦线条花叶病毒的RT-PCR试剂盒，它具有下列特点：

1、即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。

2、产品经过精心优化，分析灵敏性能到达 100拷贝/反应。

3、提供阳性对照，便于区分假阴性样品。

4、特异性高，引物是根据小麦线条花叶病毒RNA高度保守区设计，只能检测小麦线条花叶病毒，不会跟除此之外的其他病毒的RNA发生交叉反应。

5、本产品足够50次20μL体系的RT-PCR反应。

6、本产品只能用于定性实验，不能用于定量。

7、本产品只能用于科研。

规格及成分

注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。如果需要RNA片段作为阳性对照的需要单独定制。

运输及保存

低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。

自备试剂

样品RNA

使用方法

一、样品RNA的制备

1、如果有N个病毒样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL小麦线条花叶病毒RT-PCR阳性对照(1×10⁷拷贝/μL，本试剂盒提供)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。

2、用自选方法纯化上述N+2个样品的RNA。本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。

二、设置RT-PCR反应(20μL体系)

3、标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的RNA样品，额外增加的两个管一个用于RT-PCR阳性对照，另一个用于RT-PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：

4、上机进行RT-PCR，RT-PCR反应参数为:

三、电泳分析

5、取10-20uL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%-2.0%的琼脂糖凝胶。

6、阳性样品预期得到的扩增产物长度为145bp。如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或RT-PCR阴性对照)有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。

7、如果所有样品和RT-PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题(试剂，设备，程序，操作等)，需要重复并排查原因。

8、如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。