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非洲马瘟病毒RT-PCR试剂盒
非洲马瘟病毒RT-PCR试剂盒图片
包装: 50次
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产品别名:African Horse Sickness Virus RT-PCR Kit
AHSV RT-PCR Kit
产品介绍

产品及特点

非洲马瘟病毒(African Horse Sickness Virus,AHSV)会引起非洲马瘟,是一种马属动物的急性或亚急性传染病,该病以发热、皮下结缔组织与肺水肿以及内脏出血为特征,只能通过昆虫传播。马对此病的易感性最高,病死率高达 95%。本病发生有明显的季节性和地域性,多见于温热潮湿季节,常呈地方流行或暴发流行,传播迅速,因此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。为此本公司开发了本产品,可用于在科研领域快速定量检测非洲马瘟病毒。它具有下列特点:

1、一站式,用户不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。

2、根据非洲马瘟病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。

3、灵敏度可以达到 1000拷贝/反应。

4、使用一管式 RT-PCR技术,RT和 PCR两步在一个试管内完成,不需要中间转移样品,降低了操作误差和可能的污染。

5、本产品足够 50次 20μL体系的 RT-PCR。

6、本产品只能用于科研,不能用于临床。

规格及成分

成份编号十孔盒包装
5×双酶一管式 RT-PCR  Buffer91202a200 μL(橘黄盖
MMLV-Taq Mix91202b75  μL(红盖)
超纯水1009351  mL(亮黄盖)
非洲马瘟病毒 RT-PCR引物混合液13-10900yw100  μL(白盖)
非洲马瘟病毒 RT-PCR阳性对照(1×108拷贝/μL)60908-10900pc50  μL(黄盖)
使用手册13-10900sc1份

注:为避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供专一的DNA片段作为阳性对照。

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为  12个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。

自备试剂

样品 RNA

使用方法

一、样品 RNA的制备

1、如果有 N个样品,必须设置 N+2个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL非洲马瘟病毒 PCR阳性对照的 1000倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2、用自选方法纯化 N+2个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA提取试剂盒兼容。可以选购本公司的柱式病毒 RNAout。

二、设置 RT-PCR反应(20μL体系)

3、如果有 N+2个样品,则标记 N+4个 PCR管(额外增加的两个管一个是 RT-PCR阳性对照,另一个是 RT-PCR阴性对照)并按照下表在 PCR管中加入下列成分:

成份N+2个样品管RT-PCR阴性对照RT-PCR阳性对照
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer各 4  μL4  μL4  μL
非洲马瘟病毒 RT-PCR引物混合液各 2 μL2 μL2 μL
N+2个制备的 RNA样品各 12.5 μL--
超纯水-12.5 μL-
非洲马瘟病毒 RT-PCR阳性对照的1000倍稀释液--12.5 μL
MMLV-Taq Mix1.5 μL1.5 μL1.5 μL

4、上机进行 RT-PCR,RT-PCR反应参数为:

过程温度时间
逆转录42℃30  min
预变性95℃5 min
PCR反应(35个循环)95℃30  sec
PCR反应(35个循环)58℃30  sec
PCR反应(35个循环)72℃20  sec
延伸72℃7 min

5、琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物,则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照必须有预期条带出现,才有必要分析样品的实验结果,如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。

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