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柑橘溃疡病菌PCR试剂盒
柑橘溃疡病菌PCR试剂盒图片
包装: 50次
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产品别名:Xanthomonas axonopodis pv. citri PCR Kit
产品介绍

产品及特点

柑橘溃疡病(citrus bacterial canker disease, CBCD)是柑橘上最严重的病害之一,常引起柑橘落叶、枯枝、落果,导致树势减弱。此外,该病常在果实表面留下病斑,降低果实美观度,不利于市场销售。因此,柑橘溃疡病被世界 30多个国家包括我国或地区列为植物检疫性病害。它是由黄单胞杆菌柑橘致病变种(Xanthomonas axonopodis pv. citri)引起的,能够侵染多种芸香科植物,包括柑橘属中的绝大多数商品化栽培品种。远距离传播通过苗木、接穗、鲜果调运,田间传播通过风雨和潜叶蛾、恶性叶甲等昆虫。快速准确检测柑橘溃疡病菌,是减少柑橘产业经济损失的重要途径。近年来,分子生物学的快速发展为植物病原菌的检测提供了新的方法和手段。本产品是根据 PCR原理开发检测柑橘溃疡病菌的试剂盒,它具有下列特点:

1、即开即用,用户只需要提供 DNA模板。

2、引物经过精心优化,专一性强,只扩增柑橘溃疡病菌,与其他病原没有交叉反应。

3、提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR 50次,但只能用于科研。

规格及成分

成份编号十孔盒包装
PCR Magic Mix 3.0908051 mL(红盖)
超纯水1009351 mL(亮黄色)
柑橘溃疡病菌 PCR引物混合液13-4870yw100  μL(白盖)
柑橘溃疡病菌 PCR阳性对照(1×108拷贝/μL)60908-4870pc50  μL(黄盖)
使用手册13-4870sc1份

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、用自选方法纯化 N+2个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。可以选用本公司柱式细菌 DNAout。

2、如果有 N个样品,则需要做 N+2个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL柑橘溃疡病菌 PCR阳性对照的 10000倍稀释

液而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA放冰上待用。

二、设置 PCR反应(40μL体系)

3、对 N+2个样品,在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照,故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分:

成分

N+2个样品管PCR阴性对照PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0各 20 μL20 μL20 μL
柑橘溃疡病菌 PCR引物混合液各 2  μL2  μL2  μL
N+2个样品 DNA模板各 18  μL--
PCR阴性对照(水)-18  μL-
PCR阳性对照(柑橘溃疡病菌  PCR阳性对照的10000倍稀释液)--18  μL

4、按下表设置 PCR反应:

过程温度时间
预变性95℃5 min
PCR反应(35个循环)95℃30 sec
PCR反应(35个循环)55℃30 sec
PCR反应(35个循环)72℃25 sec
最后延伸72℃7 min

三、电泳检测

5、取 10-20   μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR产物阳性对照必须有 241bp大小的条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。

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