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PCR/RT-PCR >> PCR试剂盒
中华枝睾吸虫PCR试剂盒
中华枝睾吸虫PCR试剂盒图片
包装: 50次
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产品别名:Clonorchis sinensis PCR Kit
产品介绍

产品及特点

中华枝睾吸虫(Clonorchis sinensis)简称华支睾吸虫,又称肝吸虫(liver fluke ),华肝蛭 。成虫寄生于人体的肝胆管内 ,可引起华支睾吸虫病(Clonorchiasis•),又称肝吸虫病。中国超过 1200万人感染肝吸虫,由于肝吸虫感染早期并无明显不适症状,基本上不可能知道感染,肝吸虫寄生在人体肝脏的胆管内大量繁殖,引起胆汁堵塞、胆管发炎、肝纤维化、肝硬化,还有资料显示肝吸虫感染与胆管癌、肝癌的发生有密切关系。因此中华枝睾吸虫的快速诊断具有重要意义。本试剂盒根据 PCR原理开发,它具有下列特点:

1、即开即用,用户只需要提供细菌 DNA模板。

2、引物经过精心优化,专一性强,只扩增中华枝睾吸虫。

3、提供阳性对照,便于区分假阴性样品。

4、PCR mix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。

5、本试剂盒足够做 40μL体系的 PCR 50次。

6、本产品只能用于科研。

规格及成分

成份编号十孔盒包装
PCR MagicMix 3.0908051 mL(亮黄盖)
超纯水1009351 mL(蓝色)
中华枝睾吸虫 PCR引物混合液13-30600yw100  μL(白盖)
中华枝睾吸虫 PCR阳性对照(1×108拷贝/μL)13-30600pc50  μL(黄盖)
核酸释放剂试用装6120220次(1mL,绿盖)
使用手册13-30600sc1份

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、如果有 N个样品,必须设置 N+2个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL阳性对照的 10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2、用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20次免 DNA提取的核酸释放剂,本产品的裂解液可以直接作为 PCR模板,省略了 DNA提取步骤。

二、设置 PCR反应(40  μL体系)

3、对 N+2个样品,在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照,故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分:

成分

N+2个样品管PCR阴性对照PCR阳性对照
PCR MagicMix 3.0各 20 μL20 μL20 μL
中华枝睾吸虫 PCR引物混合液各 2  μL2  μL2  μL
N+2个样品 DNA模板各 18  μL--
样品制备阴性对照(超纯水)-18  μL-
中华枝睾吸虫 PCR的 1000倍稀释液--18  μL

4、按下表设置 PCR反应:

过程温度时间
预变性95℃5 min
PCR反应(35个循环)95℃15 sec
PCR反应(35个循环)55℃15 sec
PCR反应(35个循环)72℃60 sec
最后延伸72℃10 min

三、电泳检测

5、取 10-20  μL  PCR产物。电泳检测 PCR产物。本产品提供的 PCR  Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR产物长度为 265bp。阳性对照必须有此条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。

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