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禽类支原体通用PCR试剂盒
禽类支原体通用PCR试剂盒图片
包装: 50次
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产品别名:Avian Mycoplasma spp. PCR Kit
产品介绍

产品及特点

禽支原体病是由禽类支原体(AvianMycoplasmaspp.)引起的家禽的一种传染病,主要包括鸡败血支原体病、鸡传染性滑液膜炎和火鸡支原体病。禽支原体病几乎在世界各地都有发生,已成为鸡群和火鸡群的一个重要问题。危害的鸡只达 13%以上,使其体重减少 38%,饲料转化率降低 21%。在火鸡中,可引起窦炎、气囊炎和以高死亡率为特征的传染性窦炎。本试剂盒是根据 PCR原理开发,具有下列特点:

1、免 DNA制备,直接用裂解液做 PCR,更加简单快捷。

2、根据禽类支原体保守区设计引物。

3、特异性高,跟其他微生物无交叉反应。

4、灵敏高,可检测低至几个拷贝/反应的支原体污染。

5、提供内参和无感染性的支原体阳性对照(DNA片段),能有效避免实验结果的假阳性和假阴性。

6、可用于培养细胞、疫苗、血清、重组蛋白和耗材的污染检测。但不能用于临床诊断。

7、本产品足够至少 50次 40μL体系 PCR检测(含阳性对照和阴性对照反应)。

规格及成分

成份编号十孔盒包装
PCR  MagicMix  3.0908051  mL(红盖)
超纯水1009351  mL(亮黄盖)
禽类支原体通用 PCR引物混合液13-38900yw100  μL(白盖)
禽类支原体通用 PCR阳性对照

(1×108拷贝/μL)

13-38900pc50  μL(黄盖)
核酸释放剂(试用装)6120220次(1mL、绿盖
使用手册13-38900sc1份

运输及保存

低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其他试剂。

自备试剂

样品 DNA。

使用方法

一、样品 DNA的制备

1、如果有 N个样品,必须设置 N+2个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为 PC。另外用水作为 NC。

2、用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸纯化试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20次免 DNA提取的核酸释放剂,本产品的裂解液可以直接作为 PCR模板,省略了 DNA提取步骤。

二、设置 PCR反应(40 μL体系)

3、对 N+2个样品,在 PCR时需要增加一个 PCR阳性对照和一个 PCR阴性对照,故需要设置 N+4个反应。在 N+4个 PCR管中分别加入下列成分:

成分N+2个样品管PCR阴性对照管PCR阳性对照管
PCR  MagicMix  3.0各 20 μL20 μL20 μL
禽类支原体通用 PCR引物混合液各 2 μL2 μL2 μL
N+2个样品 DNA模板各 18 μL--
PCR阴性对照(超纯水)-18 μL-
PCR阳性对照 (禽类支原体通用PCR阳性对照的 10000倍稀释液)--18 μL

4、按下表设置 PCR反应:

过程温度时间
预变性95℃5 min
PCR反应(35个循环)95℃30 sec
PCR反应(35个循环)55℃30 sec
PCR反应(35个循环)72℃60 sec
最后延伸72℃10 min

三、电泳检测

5、取 10-20 μL PCR产物。电泳检测 PCR产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR产物阳性对照必须有条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10倍后重复 PCR扩增以排除 PCR抑制剂的感染。

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